Western Blotting是将电泳分离后的蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF 膜上，然后用特异性抗体检测蛋白质中特定的抗原。抗体与抗原结合后，再加酶标二抗则形成抗原、一抗和酶标二抗的三元复合物。选择一种恰当的底物与三元复合物孵育，最终显色形成肉眼可见的沉淀线或发光后由X光片或CCD采集到光信号。无论用何种底物，信号强度与膜上待检抗原的含量有关。
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